免疫沉淀及免疫共沉淀 （Immunoprecipitation，IP及Co-IP）

免疫沉淀及免疫共沉淀 （Immunoprecipitation，IP及Co-IP）

一、服务内容
1、温和条件下进行蛋白抽提，BCA定量，调整蛋白浓度
2、样品预处理：用Protein A/G Sepharose孵育（进行WB验证可以免此步骤）
3、样品与IP抗体进行孵育，之后加入Protein A/G-Agarose进行孵育
4、洗涤Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex，并对免疫复合物进行变性处理
5、沉淀产物SDS—PAGE或者WB鉴定，质谱鉴定由客户自行确定
6、Western blot检测
（1） 电泳：聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）分离蛋白样品
（2） 湿法转印（BLOTING：Tank Transfer）
（3） 杂交：用抗体鉴定膜上的特定蛋白（INCUBATION: Antibody）
（4） 化学发光检测（ECL），胶片曝光
7、预实验及正式实验服务
二、样品要求（样品处理及保存见附件）
1. 细胞＞1×107；组织＞100mg；细菌湿重＞1mg；植物＞100mg；血清＞50ul
2. 样品蛋白浓度＞1mg/ml，蛋白量＞200ug/样品

三、客户提供材料

1、新鲜或正确保存的样品
2、目的蛋白一抗，空白或者阴性同种属IgG
3、阳性对照样品（尽量提供）
4、相关文献（可选）
四、提交给客户结果
1、预实验曝光结果（胶片及扫描图），预实验采取2个一抗稀释度
2、正式实验曝光结果（胶片及扫描图）
3、完整实验报告
4、IOD值分析报告（可选）
五、服务说明
1、待检测样品可以是待检测蛋白样品，也可以是细胞、组织等其他样品
2、免疫沉淀用抗体
3、检测用抗体
4、特异性二抗
六、对照设置：由客户提供
1、空白：无抗体，只有protein A/G
2、阴性对照：无蛋白，有抗体及protein A/G
3、阴性对照：未转染细胞或者基因敲除样品
4、对应的无关空白抗体: Normal IgG
5、蛋白裂解液上清：Input