ChIP检测（Chromatin Immunoprecipitation， ChIP）

ChIP检测（Chromatin Immunoprecipitation， ChIP）

第一部分：抗体IP验证

*免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)
服务内容
1. 温和条件下进行蛋白抽提，BCA定量，调整蛋白浓度
2. 样品预处理：用Protein A/G Sepharose孵育
3. 样品与IP抗体进行孵育
4. 洗涤Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex，并对免疫复合物进行变性处理
5. 沉淀产物SDS-PAGE或者WB鉴定（目前暂不提供别的鉴定）
6. Western blot检测
（1） 电泳：聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）分离蛋白样品
（2） 湿法转印（BLOTING：Tank Transfer）
（3） 杂交：用抗体鉴定膜上的特定蛋白（INCUBATION: Antibody）
（4） 化学发光检测（ECL），胶片曝光，TotalLab Quant软件读取IOD值（可选）
样品要求（样品处理及保存见附件）
1. 细胞＞1×10⁷；组织＞30mg；细菌湿重＞50mg；植物＞100mg；血清＞50ul
2. 样品蛋白浓度＞1mg/ml，蛋白量＞500ug/样品

客户提供材料
1、 新鲜或正确保存的样品
2、 目的蛋白一抗
3、 阳性对照样品（尽量提供）
4、 相关文献（可选）
提交给客户结果
1、预实验曝光结果（胶片及扫描图），预实验采取2个一抗稀释度
2、正式实验曝光结果（胶片及扫描图）
3、完整实验报告
4、IOD值分析报告（可选）
5、抗体是否可以适用于IP是进行ChIP的前提

服务说明
1. 待检测样品可以是待检测蛋白样品，也可以是细胞、组织等其他样品；
2. 免疫沉淀用抗体；
3. 检测用抗体;
4. 特异性二抗由天德悦（北京）生物科技有限责任公司提供;
5. IP检测可以不进行，但是不能保证后续实验的结果。

对照设置
1、 空白：无抗体，只有protein A/G
2、 阴性对照：无蛋白，有抗体及protein A/G
3、 阴性对照：未转染细胞或者基因敲除样品
4、 无关空白抗体
5、蛋白裂解液上清：Input

第二部分

*染色质免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）
服务内容
1. 样品甲醛交联固定、终止、收集样品、裂解样品
2. 超声或者酶解处理样品DNA成片段，琼脂糖电泳检测
3. 样品预处理：用Protein A/G Sepharose孵育
4. 样品与IP抗体进行孵育
5. 洗涤Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex，并对免疫复合物进行变性处理，提取DNA样品
6. 检测
（1） 实时荧光定量PCR检测（最常用，免费检测）
（2） DNA芯片检测（需要联系测试厂家，需要另付费。询价）
（3） DNA产物测序（需要联系测试厂家，需要另付费。询价）