细胞相关实验服务2
免疫荧光
一、服务内容
1、对细胞内源性蛋白的表达进行表达量和初步亚细胞定位观察
2、对在哺乳动物细胞中过表达的外源性蛋白进行表达量和初步亚细胞定位观察
3、对细胞内两种内源性蛋白进行共定位观察
4、对在哺乳动物细胞中过表达的两种外源性蛋白进行共定位观察
5、细胞内源性蛋白和外源性过表达蛋白精确亚细胞定位观察（包括细胞膜、线粒体、溶酶体、核膜、核仁等多种细胞器）
6、基本沉默效果检测
二、样品要求（样品处理及保存见附件）
1、细胞＞1×107；
2、特殊培养条件的细胞请提供具体培养方法、血清和相关生长因子等
三、服务特点
1、摸索每个蛋白合适的抗体稀释度
2、精确观察所表达蛋白亚细胞定位情况
3、精确观察两种蛋白在细胞内是否有共定位
四、客户提供材料
1、待检测细胞系和目的蛋白信息（内源性蛋白）
2、待转染质粒和菌株，以及目的蛋白信息（外源性蛋白）
3、目的蛋白一抗
4、阳性对照样品（尽量提供）
五、提交给客户结果
1、免疫荧光原始图片
2、两种蛋白共定位图片
3、完整实验报告
*串联亲和纯化技术(tandem afinity purification，TAP)筛选相互作用蛋白
将带有TAP标签的融合蛋白在细胞中表达，并与内源相互作用蛋白形成复合物，细胞裂解后经FLAG标签亲和层析柱纯化，蛋白A与FLAG抗体特异结合，从而使含有标签的复合物得到第一次纯化。将纯化后的含有靶蛋白的复合物与层析柱分离，并经过含有HA标签抗体的亲和层析柱进行第二次纯化，靶蛋白上HA标签可与HA单抗结合，从而使含有HA标签的复合物得到第二次纯化。再加入过量螯合剂后与亲和层析柱分离使含有靶蛋白的复合体得到分离纯化，经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，复合物中的各个蛋白被分开，切胶、胰酶消化后，即可通过质谱鉴定复合物中与靶蛋白相互作用各个蛋白的氨基酸序列。
一、服务内容
1、TAP标签的融合蛋白表达载体的构建
2、细胞内源相互作用蛋白的分离
3、质谱鉴定复合物中各个蛋白的氨基酸序列
4、相互作用蛋白细胞内验证（CoIP）
5、相互作用蛋白细胞外验证（GST pulldown）
二、样品要求（样品处理及保存见附件）
1、相关基因载体或序列
2、待检测细胞系
三、服务特点1、可得到大量含靶蛋白的复合体；
2、蛋白表达及与复合物的结合都接近生理水平，筛选的相互作用蛋白阳性率高；
3、TAP两步亲和纯化方法，提高了纯化产物的特异性。
四、客户提供材料
1、相关基因信息和细胞系培养条件
2、相关质粒信息和质粒> 100 μg
3、相关文献（可选）
五、提交给客户结果
1、TAP标签质粒和甘油菌
2、质粒测序结果和碱基丰度图
3、TAP融合蛋白
4、互作蛋白鉴定结果（质谱结果）
5、CoIP结果（蛋白纯化SDS-PAGE电泳图）
6、Pull down （蛋白纯化SDS-PAGE电泳图）
七、服务项目说明
客户要求加可曝光marker的，需事先说明，并按照可曝光项目收费
*GST pulldown体外验证蛋白相互作用
实验原理
将目的基因构建至GST（Glutathione S transferase）标签或者His载体上，通过诱导表达出GST标签或者His标签融合探针蛋白。通过GST标签将融合探针蛋白与层析柱上或固相化载体上的GTH（Glutathione）亲和或者Ni填料亲和。当与融合探针蛋白有相互作用的靶蛋白通过层析柱或固相载体时就可被吸附而分离。从而在体外验证两个蛋白是否有相互作用，或者寻找可能与目的蛋白有相互作用的靶蛋白
一、服务内容
1、GST标签或者His融合蛋白表达载体的构建和表达验证
2、验证融合探针蛋白与未知（或靶）蛋白间的新的相互作用
3、验证探针蛋白与已知蛋白质间可疑的相互作用
4、免费进行胞浆蛋白内参检测（胞核蛋白内参需收取费用）
二、样品要求（样品处理及保存见附件）
1、融合探针基因和靶基因载体>10μg，或甘油菌（-20摄氏度保存时间不超过一年）
2、靶细胞＞1×107
三、服务特点
1、摸索每个基因合适的诱导表达条件
2、优化靶蛋白与融合探针蛋白共孵育条件
3、优化靶细胞裂解条件及与融合蛋白蛋白共孵育条件
四、客户提供材料
1、新鲜或正确保存的蛋白样品（直接进行pull down）
2、探针基因和靶基因相关序列信息
3、靶细胞系培养条件
4、阳性对照样品（尽量提供）
5、相关文献（可选）
五、提交给客户结果
1. 完整实验报告 (包括具体实验步骤和实验图片等)
2. 完整基因序列的质粒>10μg和载体甘油菌株
3. 完整测序报告和序列碱基图
4、WB实验曝光结果（胶片及扫描图）
5、IOD值分析报告（可选）
六、服务项目说明
客户要求加可曝光marker的，需事先说明，并按照可曝光项目收费
*流式细胞术细胞检测与分选
流式细胞术(flow cytometry)是利用流式细胞仪(flow cytometer)对对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒(如微球,细菌,小型模式生物等)逐个进行快速定量分析、多参数分析和分选的现代细胞分析技术。
一、服务内容
1、特定类型细胞检测和分析
1）检测药物处理和蛋白表达对细胞周期调控影响
2）检测药物处理和蛋白表达对细胞凋亡
3）检测药物处理和蛋白表达对细菌生长、抑制和毒力等的影响
2、对表达特定蛋白细胞进行分选
1）单标记细胞检测和分选
2）CD4/CD8阳性T细胞等多标记细胞的检测和分选
3）其它多标记细胞的检测和分选
二、样品要求（样品处理及保存见附件）
1、细胞＞1×107；新鲜血液>10 mL
2、细菌单菌落或菌液
三、服务特点
1、丰富的抗体单标记和多标记经验
2、短时间内可进行大量细胞的检测和分选
3、专业的数据处理与分析
四、客户提供材料
1、细胞＞1×107和特殊细胞培养条件
2、目的蛋白一抗
3、阳性对照样品（尽量提供）
4、相关文献（可选）
五、提交给客户结果
1、完整实验报告（包括一维单参数直方图，二维点状图和圈门后分析图等）
2、分选后的细胞（具体细胞数根本细胞种类而不同）